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预定金额和每个测试化合物的浓度,培养在30 ° C在反应混合物中含有的Tris - HCl(40毫米),氯化镁(5毫米),2 - 巯基乙醇(4毫米),CAMP(pH值8.0)10分钟(1μM),[3H] CAMP(10纳米),和一个PDE原液。 1分钟,在冰浴冷却,混合物置于煮沸的水混合1 5' -核苷酸酶的单位,然后培养在30 ° C为10分钟。除了甲醇1 ml的反应是停止。解决的办法是通过一个DOWEX 1 - X8(BIO - RAD,里士满,CA)列吸附不水解材料,然后在洗脱的放射性测量。

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预定的量和浓度的每个测试复合孵出 10 分钟反应混合物 (8.0 pH) 在 30 ° C 包含席 HCl (40 毫米),MgCl2 (5 mM),2-巯基乙醇 (4 毫米)、 营 (1 μ M)、 [3 H] 营 (10 nM),和偏微分方程股票的解决方案。混合是放在 1 分钟煮沸的水、 冰浴中冷、 混有 1 个单位的 5 ′ 核苷酸,然后孵出 10 分钟 30 ° C。通过添加 1 毫升甲醇的停止反应。通过解决方案通过 Dowex 1-X 8 加利福尼亚州里士满生物 Rad) 来衡量吸附材料 unhydrolyzed,然后洗脱中的放射性的列。

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每一个预先确定的数额和集中测试化合物是培养皿置于30°C为10分钟,一个反应混合物(pH8.0),其中载有「招聘教师资讯服务」-HCl(40mm),MgCl2(5mm),2-mercaptoethanol(4mm)、营地(1微米),[3]h营(10Nm),和一种PED股票解决。 该混合物放在用煮沸的水为1分钟,水冷式在一个冰浴、混合与1股5'-nucleotidase,然后培养皿置于30°C,10分钟的反应是停止以外的1毫升的甲醇。 该解决办法是通过一个dowex1-X8(bio-rad、Richmond,CA)栏以吸附unhydrolyzed材料,然后是累赘的放射性的衡量。

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每种测试化合物的被预先决定的数额和集中在包含Tris-HCl (40毫米),氯化镁(5毫米), 2巯基乙醇(4毫米),阵营(1 μM), [3H]阵营(10毫微米)和PDE储备溶液的反应混合物(酸碱度8.0)被孵化了在30°C 10分钟。 混合物在煮沸的水中安置了1分钟,冷却了在冰浴,混合与5 ′ - nucleotidase 1个单位,然后被孵化在30°C 10 min。 反应路过1机器语言的加法甲醇。 解答通过Dowex 1-X8 (生物Rad,里士满,加州)专栏吸附unhydrolyzed材料,放射线在洗提然后被测量了。
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